瓊脂糖凝膠電泳試劑盒 ,試劑盒
| 別名: | |||
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| Cas號(hào): | 物化性質(zhì): | ||
| 分子式: | 熔點(diǎn): | ||
| 分子量: | 沸點(diǎn): | ||
| EINECS編號(hào): | 密度: | ||
| MDL號(hào): | 儲(chǔ)存條件: | ||
本試劑盒適用于瓊脂糖凝膠DNA的純化回收。在高離序鹽存在的情況下，DNA片斷選擇性的吸附于離心柱內(nèi)的硅基質(zhì)膜上，再通過一系列快速的漂洗-離心的步驟，漂洗液將引物、核苷酸、蛋白、酶等雜質(zhì)去除，最后低鹽、高pH值的洗脫緩沖液將純凈DNA從硅基質(zhì)膜上洗脫。
- 離心吸附柱內(nèi)硅基質(zhì)膜全部采用進(jìn)口世界著名公司特制吸附膜，柱與柱之間吸附量差異極小，可重復(fù)性好。克服了國(guó)產(chǎn)試劑盒膜質(zhì)量不穩(wěn)定的弊端。
- 使用了優(yōu)質(zhì)溶膠液，不含傳統(tǒng)溶膠液的碘化鈉和高氯酸鹽，不抑制回收后酶切、連接克隆等下游反應(yīng)。
- 溶膠液調(diào)制成為了黃顏色，便于觀察溶膠效果和監(jiān)測(cè)pH值變化從而達(dá)到最佳結(jié)合效果，大大提高回收效率。
- 改進(jìn)的溶膠液配方，大大提高了緩沖能力和穩(wěn)定性，即使樣品變化很大也能將pH緩沖在最佳結(jié)合范圍內(nèi)。
- 快速、方便，不需要使用有毒的苯酚、氯仿等試劑，也不需要乙醇沉淀。
- 在長(zhǎng)波紫外燈下，用干凈刀片將所需回收的DNA條帶切下，盡量切除不含DNA的凝膠，得到凝膠體積越小越好。
- 將切下的含有DNA條帶凝膠放入1.5mL離心管，稱重。
先稱一個(gè)空1.5mL離心管重量，然后放入凝膠塊后再稱一次，兩次重量相減，得到凝膠的重量。 - 加3倍體積溶膠液DD。
如果凝膠重為100mg，其體積可視為100μL，則加入300μL溶膠液。
如果凝膠濃度大于2％，應(yīng)加入6倍體積溶膠液。 - 56℃水浴放置10分鐘（或直至膠完全溶解）。每2～3分鐘渦旋震蕩一次幫助加速溶解。
- 可選，一般不需要：每100mg最初的凝膠重量加入150μL的異丙醇，震蕩混勻。
有時(shí)候加入異丙醇可以提高回收率，加入后不要離心?；厥沾笥?Kb的片段時(shí)，不加入異丙醇，加入有時(shí)反而可能降低回收效率。 - 將上一步所得溶液加入吸附柱EC中（吸附柱放入收集管中），室溫放置1分鐘，12000rpm離心30～60秒，倒掉收集管中的廢液。
使用平衡液預(yù)處理硅膠膜吸附柱為必做步驟，具體方法參見附錄參考“關(guān)于平衡液的使用”。
如果總體積超過750μL，可分兩次將溶液加入同一個(gè)吸附柱EC中。
過濾下的溶膠液和收集管內(nèi)殘存的強(qiáng)堿性平衡液混合后，溶膠液可能會(huì)從黃色變成橘紅甚至紫色，此為酚紅pH指示劑堿性條件下的正常顏色變化。 - 加入600μL漂洗液WB （請(qǐng)先檢查是否已加入無水乙醇!），12000rpm離心30秒，棄掉廢液。
- 加入600μL漂洗液WB，12000rpm離心30秒，棄掉廢液。
- 將吸附柱EC放回空收集管中，12000rpm離心2分鐘，盡量除去漂洗液，以免漂洗液中殘留乙醇抑制下游反應(yīng)。
- 取出吸附柱EC，放入一個(gè)干凈的離心管中，在吸附膜的中間部位加50μL洗脫緩沖液EB（洗脫緩沖液事先在65～70℃水浴中加熱效果更好），室溫放置2分鐘，12000rpm離心1分鐘。如果需要較多量DNA，可將得到的溶液重新加入吸附柱中，離心1分鐘。
洗脫體積越大，洗脫效率越高，如果需要DNA濃度較高，可以適當(dāng)減少洗脫體積，但是最小體積不應(yīng)少于25μL，體積過小降低DNA洗脫效率，減少產(chǎn)量。
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瓊脂糖凝膠電泳試劑盒
