一、貨號(hào)：SFK080202（50mL純化量）

二、試劑原理：

本試劑盒利用不同蛋白需要的沉淀試劑和沉淀?xiàng)l件不同，通過(guò)大量實(shí)驗(yàn)分析驗(yàn)證而得到的一個(gè)與傳統(tǒng)沉淀純化相比有較大不同的精細(xì)的具有高活性、高產(chǎn)率、快速以及良好重復(fù)性的單克隆抗體的純化方法。

三、試劑特點(diǎn)：

本試劑盒特點(diǎn)在于純化操作的簡(jiǎn)單化、所得抗體保持高活性和較高純度。實(shí)驗(yàn)表明，本試劑盒可以得到90%以上純度的抗體；并且由于配方考究，抗體在純化過(guò)程中幾乎沒(méi)有損傷，完全保持應(yīng)有的活性；實(shí)際應(yīng)用極好。

四、適用范圍：

本試劑盒適用于小鼠IgM類單克隆抗體腹水的純化，不能用于IgG和IgA類單克隆抗體腹水的純化實(shí)驗(yàn)，如需要可選擇本公司其它貨號(hào)的純化試劑，它能為您帶來(lái)良好的結(jié)果。

五、試劑組成：

六、純化步驟：

1、 從冰箱中取出試劑盒放置室溫恢復(fù)溫度30分，期間可將單克隆抗體腹水從冰箱中取出，室溫避光復(fù)溫15分鐘，隨后用自來(lái)水邊沖邊搖勻快速解凍。

2、 將化開(kāi)的單克隆抗體腹水8000-12000RPM 室溫 離心10分鐘。

3、 先吸棄上面浮沫和油脂，然后將上清轉(zhuǎn)出到另一個(gè)干凈容器或離心管；按每1毫升單克隆抗體腹水加入純化液A（加前確定沒(méi)有試劑析出，如有析出搖晃溶解即可） 1毫升（必須精確），室溫避光倒轉(zhuǎn)30分。

4、 8000RPM 室溫離心10-20分鐘，沉淀用純化液B溶解到原單克隆抗體腹水1/2體積，再按此體積每1毫升加入純化液C （加前確定沒(méi)有試劑析出，如有析出搖晃溶解即可）1毫升（（必須精確），室溫避光倒轉(zhuǎn)10分鐘。

5、 8000RPM  室溫離心10-20分鐘，棄沉淀收集上清；每1毫升上清液加純化液D（加前確定沒(méi)有試劑析出，如有析出搖晃溶解即可）  1毫升（必須精確），室溫避光倒轉(zhuǎn)20分鐘。

6、 8000RPM 室溫離心10-20分鐘，收集沉淀用純化液B收集溶解沉淀到原單克隆抗體腹水體積的1/3。透析袋用純水浸泡5分鐘，然后用手揉捏數(shù)次，接純水沖洗干凈，抗體放入扎好。透析液用純水溶解透析試劑到8L（也可先溶解到400ML，用時(shí)20X稀釋），將要透析的抗體袋子放入?？贵w體積：透析液體積=1:100，4℃透析過(guò)夜。收集透析后抗體。

7、 以透析后抗體體積：純化液E的體積=9：1的比例加入純化液E搖勻（也就是9體積抗體加1體積純化液E），靜置5min。8000RPM  室溫離心10分鐘，棄沉淀收集上清即為純化好的抗體。

8、 將純化好的抗體放入用透析夾或繩扎緊。抗體體積：透析液體積=1:50以上；4℃透析，中間換液三次，透析總時(shí)間不超過(guò)24小時(shí)。然后8000RPM 室溫離心10分鐘，收集上清測(cè)蛋白濃度并調(diào)控在5mg/ml左右加10/萬(wàn)NaN3防腐并除菌過(guò)濾-20℃?zhèn)溆谩?/span>

七、 注意事項(xiàng)：

1、 溶血嚴(yán)重和變質(zhì)的腹水不得用于純化。

2、 離心溫度不要超過(guò)37℃。

3、 操作和量取試劑要細(xì)致精準(zhǔn),否則影響純度。

4、 不攪拌透析每次靜置透析時(shí)間不得低于4小時(shí)。

5、 如覺(jué)得透析太慢可以選擇超濾管。

6、由于單抗制備存在人工干預(yù)成分，現(xiàn)實(shí)中極其少數(shù)IgM細(xì)胞株抗體結(jié)構(gòu)和性質(zhì)會(huì)有突變，如果確認(rèn)使用正確但沒(méi)有得到合適抗體，建議換用IgG純化試劑盒嘗試。

特別提示：如果您在實(shí)驗(yàn)過(guò)程中遇到任何困難，請(qǐng)及時(shí)聯(lián)系我們技術(shù)團(tuán)隊(duì)獲取支持。