中文名稱：鞘磷脂酶
CAS號：9031-54-3
中文別名：鞘磷脂酶;鞘磷酯酶;鞘磷脂酶(金黃色葡萄球菌);
英文名稱：Sphingomyelinase from Staphylococcus aureus
技術(shù)指標
外觀: 白色或褐色無定形凍干粉末;蛋白純度:≥90%; 比活性: ≥100 U/mg 酶粉;葡萄糖氧化酶: ≤0.01%;ATP酶: ≤0.005%; 過氧化氫酶: ≤0.001%.
酶學性質(zhì)
來源:微生物，鞘磷脂酶;分類: EC 3.1.4.12; 分子量: 36kDa(SDS-PAGE); 等電點:8.6; Km值: 2.4×10-5 M(Sphingomyelin); 抑制劑:EDTA; 最適pH:8.0; 最適溫度:45℃; pH穩(wěn)定性:6.0-8.0(37℃,60min); 熱穩(wěn)定性: 40℃ 以下穩(wěn)定(pH 7.5,30 min);穩(wěn)定性 :-25～-15℃ 靜置保存 12 個月保持 90% 以上活性.
用途: 用于小而低密度脂蛋白試劑的研發(fā)和大量配制。
酶活定義:單位酶活定義為在下述條件下，每分鐘催化生成 1μmol H2O2 所需的酶量。
試劑準備
試劑I：0.1 M Tris-HCl，pH 8.0。
試劑II：10 mM MgCl2 溶液。
試劑III：6 mM 鞘磷脂溶液：稱取 45.8 mg 的鞘磷脂，溶于 10mL 的無菌水中（含 5% 的 Triton X-100）。
試劑IV：500 U/mL ALP溶液。
試劑V：120 U/mL CHO溶液。
試劑VI：1 kU/mL POD溶液，取1000 U 的 POD 溶于1mL 的雙蒸水。
試劑VII：50 mM 4–AA 溶液。
試劑VIII：50 mM TOOS 溶液。
試劑IX：1.0 M NaCl 溶液。
試劑X：1%（W/V）Triton X-100 溶液。
酶稀釋液：10 mM pH 8.0 Tris-HCl，含 0.1% Triton X-100 和 10 mM NaCl。
按如下配制反應(yīng)混合物：試劑 II: 20mL; 試劑III:10mL;試劑VI:0.5mL; 試劑VII: 3mL; 試劑VIII: 3 mL;試劑IX:1mL; 試劑X: 10mL ;試劑I:定容至 90mL 樣品：用酶稀釋液將酶稀釋至0.01U/mL