別名: | DNS顯色液 DNS試劑 3,5二硝基水楊酸溶液 DNS Reagent | ||
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Cas號: | 物化性質(zhì): | ||
分子式: | 熔點: | ||
分子量: | 沸點: | ||
EINECS編號: | 密度: | ||
MDL號: | 儲存條件: |
產(chǎn)品簡介
DNS即二硝基水楊酸法是利用堿性條件下,二硝基水楊酸(DNS)與還原糖發(fā)生氧化還原反應(yīng),生成3-氨基-5-硝基水楊酸,該產(chǎn)物在煮沸條件下顯棕紅色,且在一定濃度范圍內(nèi)顏色深淺與還原糖含量成比例關(guān)系的原理,用比色法測定還原糖含量的。因其顯色的深淺只與糖類游離出還原基團的數(shù)量有關(guān),而對還原糖的種類沒有選擇性,故DNS方法適合用在多糖(如纖維素、半纖維素和淀粉等)水解產(chǎn)生的多種還原糖體系中。
操作步驟(僅供參考):?
1、?還原糖的提取:?
2、?總糖的水解和提取:
3、?制作葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)曲線:取干凈離心管或試管,按下表進行操作,以0號調(diào)零,檢測540nm處吸光度,以吸光度值為縱坐標(biāo),各標(biāo)準(zhǔn)濃度(mg/ml)為橫坐標(biāo)作圖得標(biāo)準(zhǔn)曲線。
加入物質(zhì)(ml)? | 0 | 1 | 2 | 3 | 4 | 5 |
Glu標(biāo)準(zhǔn)(1mg/ml) | 0 | 0.2 | 0.4 | 0.6 | 0.8 | 1 |
蒸餾水 | 1 | 0.8 | 0.6 | 0.4 | 0.2 | 0 |
DNS試劑 | 2 | 2 | 2 | 2 | 2 | 2 |
沸水浴中5分鐘后取出,流水冷卻至室溫 | ||||||
蒸餾水 | 9 | 9 | 9 | 9 | 9 | 9 |
相當(dāng)于葡萄糖量 | 0 | 0.2 | 0.4 | 0.6 | 0.8 | 1 |
4、還原糖測定:取制備好的還原糖提取液或者總糖水解液1ml,分別加入DNS試劑2ml,其余操作同標(biāo)準(zhǔn)曲線的操作,540nm處測定各管的吸光度。
計算:??
還原糖的百分含量:?
還原糖含量(%)=(C×VT)/(m×Vs)×100????
總糖的百分含量:
總糖含量(%)=(C×VT)/(m×Vs)×100×10×0.9
注意事項:?
1、?上述低溫試劑避免反復(fù)凍融,以免失效或效率下降。?
2、?待測樣本如不能及時測定,應(yīng)置于2~8℃保存,3天內(nèi)穩(wěn)定。
3、?如果樣品還原糖濃度過高,應(yīng)用蒸餾水稀釋后重測,結(jié)果乘以稀釋倍數(shù)。?
4、?總糖計算公式在測定干擾雜質(zhì)很少、還原糖含量相對總糖含量很少時使用,×0.9是為了從測定出的總糖水解成單糖中,扣除水解時所消耗的水量。