大腸桿菌PCR擴(kuò)增試劑盒 ,100T
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| Cas號(hào): | 物化性質(zhì): | ||
| 分子式: | 熔點(diǎn): | ||
| 分子量: | 沸點(diǎn): | ||
| EINECS編號(hào): | 密度: | ||
| MDL號(hào): | 儲(chǔ)存條件: | ||
本試劑盒是一種使用特別便捷的含有藍(lán)色和橙色染料(電泳位置分別約4kb和50bp)的2倍濃度的PCR預(yù)混液，含有2X Taq DNA Polymerase、2X PCR Buffer、2X dNTP和2X Loading Buffer等，只需加入大腸桿菌菌落或菌落稀釋物、引物和水即可進(jìn)行PCR擴(kuò)增，并且擴(kuò)增完畢后可以直接上樣電泳。本試劑盒主要適用于質(zhì)粒轉(zhuǎn)化大腸桿菌后陽(yáng)性克隆的菌落PCR篩選和鑒定。
本試劑盒對(duì)于大腸桿菌菌落的兼容性好。本試劑盒經(jīng)過(guò)反復(fù)優(yōu)化，確保直接挑取菌落進(jìn)行PCR的擴(kuò)增效果良好，菌落的存在不會(huì)顯著干擾PCR反應(yīng)。
本試劑盒使用特別便捷。菌落直接PCR試劑盒中提供的E.coli Colony Direct PCR Mix (Green, 2X)已經(jīng)含有所有的通用組分，用戶只需自備引物和水即可對(duì)大腸桿菌菌落進(jìn)行PCR擴(kuò)增。它大大簡(jiǎn)化了PCR操作，使操作更加快捷，也減少了PCR操作過(guò)程中可能導(dǎo)致的污染，使PCR的重復(fù)性更好；同時(shí)E.coli Colony Direct PCR Mix (Green, 2X)中已經(jīng)包含了上樣緩沖液組分，PCR擴(kuò)增結(jié)束后即可直接上樣電泳，無(wú)需添加上樣緩沖液。
本試劑盒擴(kuò)增效果好。本試劑盒可以擴(kuò)增出長(zhǎng)達(dá)8kb的片段，但通常更適合用于擴(kuò)增2kb以下的DNA片段。
本試劑盒中提供了雙色染料，便于電泳時(shí)觀察電泳進(jìn)程。本產(chǎn)品中加入了藍(lán)色和橙色的電泳示蹤染料(整體呈現(xiàn)綠色)，其在濃度為1%瓊脂糖膠中的遷移位置分別大約位于4kb和50bp處。PCR結(jié)束后可直接進(jìn)行電泳檢測(cè)，無(wú)需再添加上樣緩沖液。藍(lán)色和橙色示蹤染料不會(huì)影響對(duì)相應(yīng)DNA條帶的觀察和檢測(cè)。
本產(chǎn)品穩(wěn)定性高。經(jīng)測(cè)試，本試劑盒反復(fù)凍融15次后對(duì)PCR的擴(kuò)增效果無(wú)顯著影響。反復(fù)凍融15次前后，使用不同引物擴(kuò)增100-1500bp間不同長(zhǎng)度目的片段的效果如圖1所示。
圖1. 本產(chǎn)品用于大腸桿菌菌落PCR的效果圖。特定質(zhì)粒轉(zhuǎn)化DH5α菌株后涂板，第二天挑取10個(gè)克隆，采用質(zhì)粒上的通用引物并使用本試劑盒進(jìn)行菌落PCR檢測(cè)。PCR擴(kuò)增片段為1500bp左右。1-4，直接挑取克隆使用本試劑盒進(jìn)行PCR擴(kuò)增；5-8，挑取克隆后加入到10μl水中混勻后取3μl用于本試劑盒的PCR擴(kuò)增；9-10，本試劑盒反復(fù)凍融15次后直接挑取克隆進(jìn)行PCR擴(kuò)增檢測(cè)。
每毫升E.coli Colony Direct PCR Mix (Green, 2X)若用于50微升的PCR反應(yīng)體系，足夠用于40個(gè)反應(yīng)；若用于20微升的PCR反應(yīng)體系，足夠用于100個(gè)反應(yīng)。
包裝清單：| 產(chǎn)品編號(hào) | 產(chǎn)品名稱(chēng) | 包裝 |
| R65007S | E.coli Colony Direct PCR Mix (Green, 2X) | 1ml |
| R65007M | E.coli Colony Direct PCR Mix (Green, 2X) | 1ml×4 |
| R65007L | E.coli Colony Direct PCR Mix (Green, 2X) | 1ml×20 |
| — | 說(shuō)明書(shū) | 1份 |
-20℃保存，至少一年有效。適當(dāng)避免反復(fù)凍融。如需頻繁使用，可取適量存放于4℃，至少3天內(nèi)有效。
注意事項(xiàng)：由于PCR反應(yīng)非常靈敏可以擴(kuò)增目的基因序列超過(guò)1000萬(wàn)倍，在使用Fusion?酶時(shí)請(qǐng)注意避免微量待擴(kuò)增DNA的污染，并盡量考慮設(shè)置不加模板的空白對(duì)照以確認(rèn)是否有待擴(kuò)增DNA的污染。
Taq DNA polymerase在PCR過(guò)程中每個(gè)循環(huán)的出錯(cuò)幾率約為2.2×10-5，對(duì)于大于1kb的DNA片段的克隆推薦使用出錯(cuò)幾率更低的DNA聚合酶，例如Pfu DNA polymerase、Taq DNA polymerase等。對(duì)于普通的PCR或RT-PCR進(jìn)行定性或定量檢測(cè)，Taq DNA polymerase是最佳選擇。
盡管本產(chǎn)品經(jīng)過(guò)15次反復(fù)凍融后仍具有和凍融前幾乎相同的PCR擴(kuò)增效果，但仍宜適當(dāng)避免反復(fù)凍融本產(chǎn)品，多次反復(fù)凍融可能使產(chǎn)品性能下降。
使用本產(chǎn)品前，一定要完全融化，并上下顛倒輕輕混勻后才能使用，盡量避免起泡。
本產(chǎn)品僅限于專(zhuān)業(yè)人員的科學(xué)研究用，不得用于臨床診斷或治療，不得用于食品或藥品，不得存放于普通住宅內(nèi)。
為了您的安全和健康，請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。
大腸桿菌PCR擴(kuò)增試劑盒
