SHuffleT7E.coli：100μl/支  
pUC19(controlvector，10pg/μl):10μl  
保存條件(保質(zhì)期)：-80℃（6個(gè)月）  
基因型  
F′lac,pro,lacIq/Δ(ara-leu)7697araD13fhuA2lacZ::T7gene1Δ(phoA)PvullphoRahpC*galE(orU)galKλatt::pNEB3-r1-cDsbC(SpecR,laclq)ΔtrxBrpsL150(StrR)ΔgorΔ(malF)3  
產(chǎn)品說(shuō)明  
SHuffleT7E.coli菌株是K12的衍生菌株。該菌株的染色體中整合了一個(gè)拷貝的二硫鍵異構(gòu)酶DsbC基因，可以促進(jìn)含有二硫鍵蛋白的正確折疊；此外DsbC還是一個(gè)分子伴侶，可以幫助不含二硫鍵蛋白正確折疊，形成正確構(gòu)象，同時(shí)該菌株可降低目的基因的本底表達(dá)，適合于毒性基因的原核表達(dá)。SHuffleT7E.coli菌株染色體中整合了一個(gè)拷貝的T7RNA聚合酶基因，可以表達(dá)噬菌體T7RNA聚合酶，適合于T7啟動(dòng)子誘導(dǎo)的蛋白表達(dá)；該菌株還可以表達(dá)大腸桿菌RNA聚合酶，所以可用于pET系列，pGEX，pMAL等質(zhì)粒的蛋白表達(dá)。SHuffleT7E.coli菌株具有抗T1噬菌體感染的特點(diǎn)，具有鏈霉素，壯觀霉素抗性。SHuffleT7E.coli感受態(tài)細(xì)胞由特殊工藝制作，pUC19質(zhì)粒檢測(cè)轉(zhuǎn)化效率達(dá)108cfu/μgDNA。  
操作方法  
1.SHuffleT7E.coli感受態(tài)細(xì)胞從-80℃拿出，迅速插入冰中，5分鐘后待菌塊融化，加入目的質(zhì)粒并用手撥打EP管底輕輕混勻(避免用槍吸打)，冰中靜置25分鐘。  
2.42℃水浴熱激45秒，迅速放回冰中并靜置2分鐘，晃動(dòng)會(huì)降低轉(zhuǎn)化效率。  
3.向離心管中加入700μl不含抗生素的LB無(wú)菌培養(yǎng)液，37℃，200rpm復(fù)蘇60分鐘。  
4.5000rpm離心一分鐘收菌，留取50μl左右上清輕輕吹打重懸菌塊并涂布到含相應(yīng)抗生素的LB培養(yǎng)基上。  
5.將平板倒置放于37℃培養(yǎng)箱過(guò)夜培養(yǎng)。  
IPTG配制：  
Preparea1MsolutionofIPTG(Isopropyl-β-D-thiogalactoside;Isopropyl-β-D-thiogalactopyranoside)  
bydissolving2.38gofIPTGinddwaterandadjustthefinalvolumeto10ml.Filtersterilizebeforeuse.  
注意事項(xiàng)  
1.感受態(tài)細(xì)胞最好在冰中緩慢融化，插入冰中8分鐘內(nèi)加入目標(biāo)DNA，不可在冰中放置時(shí)間過(guò)長(zhǎng)，長(zhǎng)時(shí)間存放會(huì)降低轉(zhuǎn)化效率。  
2.轉(zhuǎn)化高濃度的質(zhì)?？上鄳?yīng)減少最終用于涂板的菌量。  
3.誘導(dǎo)時(shí)，IPTG濃度可選（0.1-10mM均可）。  
4.為獲得需要量的蛋白，最佳誘導(dǎo)時(shí)間，溫度，IPTG濃度需實(shí)驗(yàn)者優(yōu)化。  
5.SHuffleT7E.coli菌株具有鏈霉素，壯觀霉素抗性，不可用于具有鏈霉素，壯觀霉素抗性質(zhì)粒的轉(zhuǎn)化。